在 Daicel 手性柱（如 CHIRALPAK® AD-H、CHIRALCEL® OD-H 等多糖涂敷型手性柱）的使用中，柱效下降（表現為理論板數降低、分離度變差、峰形展寬）是常見問題，多因固定相殘留雜質、異丙醇吸附或輕微固定相聚集導致。

而 100% 乙醇沖洗 是恢復柱效的高效手段 —— 其極性適中，既能溶解殘留污染物，又不破壞硅膠表面的多糖涂敷層，尤其適配 AD-H、OD-H 等正相常用手性柱，以下為正確操作流程。

一、為什么 100% 乙醇能恢復柱效？

AD-H、OD-H 手性柱的固定相為硅膠表面涂敷直鏈淀粉 / 纖維素衍生物，柱效下降多源于：

① 高比例異丙醇流動相殘留（如 AD-H 用 80%~100% 異丙醇后）；

② 生物堿、芳香族化合物等強吸附樣品殘留；

③ 固定相因溶劑交替產生的輕微聚集。

100% 乙醇可通過以下作用恢復柱效：

· 溶解殘留的異丙醇、樣品雜質，避免其堵塞手性空腔；

· 緩解多糖固定相的輕微聚集，恢復螺旋結構的選擇性；

· 中性特性不會破壞涂敷層，兼容 AD-H、OD-H 的固定相材質。

二、正確操作步驟（以 4.6mm 內徑分析柱為例）

1. 預處理：先去除 “高危雜質"

沖洗前需先清除柱內鹽、強堿性添加劑（如二乙胺），避免與乙醇反應或析出：

· 若之前用 正相體系（如烷烴 / 異丙醇）：用 正己烷 / 異丙醇（90:10 v/v） 以 0.5ml/min 沖洗 20 分鐘，去除殘留異丙醇與堿性添加劑；

· 若之前用 反相體系（如乙腈 / 水）：先用 水 / 乙腈（60:40 v/v） 以 0.5ml/min 沖洗 30 分鐘，去除緩沖鹽，防止鹽與乙醇混合析出堵塞柱床。

2. 100% 乙醇沖洗：控制流速與時間

· 流速：4.6mm 內徑的 AD-H、OD-H 手性柱，推薦流速 0.5ml/min（半制備柱按內徑換算，如 20mm 內徑用 19ml/min），避免高流速導致柱壓驟升（不超過 30MPa）；

· 時間：室溫下沖洗 60 分鐘，確保乙醇充分浸潤柱床 —— 對殘留嚴重的柱（如 OD-H 分離生物堿后），可延長至 90 分鐘，但不建議超過 2 小時，避免固定相過度溶脹。

3. 后續(xù)平衡：恢復分析條件

沖洗結束后，需用目標分析的流動相平衡柱床，避免溶劑突變影響分離：

· 正相分析（如 AD-H 拆分芳香族化合物）：用 正己烷 / 異丙醇（90:10） 以 0.5ml/min 平衡 30 分鐘，再恢復正常流速（1.0ml/min）；

· 復測柱效：進樣標準品（如 AD-H 用聯萘酚，OD-H 用C10H15NO），通常理論板數可恢復至初始值的 85% 以上，分離度明顯改善。

三、適用場景與注意事項

1. 適配柱型：僅用于多糖涂敷型

100% 乙醇沖洗僅適用于 AD-H、OD-H、AS-H、OJ-H 等多糖涂敷型手性柱，禁止用于 AGP（蛋白質鍵合型，乙醇會導致蛋白質變性）、CR (+)（冠醚型，乙醇破壞涂敷層）。

2. 禁忌：避免頻繁操作

每月最多沖洗 1~2 次，過度沖洗會加速多糖固定相老化；若沖洗后柱效仍無改善，需排查是否為固定相永遠損壞（如強堿性溶劑腐蝕硅膠），而非單純殘留問題。

通過以上操作，可低成本解決 AD-H、OD-H 等 Daicel 手性柱的常見柱效下降問題，既能避免因柱效低導致的分析誤差，又能延長手性柱使用壽命，適配藥物研發(fā)、天然產物分析等場景的長期使用需求。

廣州綠百草作為 Daicel 大賽璐授權代理商，提供色譜柱選型、方法開發(fā)等技術支持，助力客戶高效實現手性分離與分析。